separation：總整理30
一‧分離的方法：
(1) 沉澱(precipitation)：DNA→酒精；蛋白質→ammonium sulfate
(2) 蒸餾(distillation)：例：將氮化合物→氨氣
(3) 淬取(extraction)：利用分液漏斗；分配係數K=(留著的)/(排掉的)；淬取效率(v1/v1+kv2)
(4) 層析法：電泳；管柱等等
二‧層析法：
(1) mobile phase：帶著被分析物移動，
stationary phase：fixed in place(planar/column/particle)
(2) 種類：平板層析(TLC/PC)，HPLC，GC等
(3) 機制：
a. Partition→利用stationary/mobile phase對分子的吸引力來做分離
b. adsorption→利用分子的吸附力(ex.silica)與mobile phase做分離
c. ion exchange→利用分子的帶電做篩選→stationary帶有電荷，以靜電力做分離的動作
d. gel filtration→利用分子的大小作篩選→大分子較快，小分子困在gel中
e. affinity→具有專一性，利用酵素或是抗體，滯阻特定物質→經由改變mobile phase而釋放
(4) 層析圖譜(chromatogram)：能發現時間對分子數量的圖為『常態分布』
(5) 重要的名詞：
a. retention time：分析物在column中的時間
b. dead/void time(tM)：mobile phase在column中的時間
c. ts：tr-tm
d. retention factor：ts/tm
(6) 相關理論：
Plate→將column假想成許多plate組成
→管柱長(L)=理論板數(N)X理論板高(H)
重要公式：理論板高(H)=σ^2/L；理論板數(N) =16(tr/w)^2→w(底峰寬)
H越小→代表column的efficiency越好
Rate→影響板高(efficiency)的因素
Van Deemter equation：H=A+B/u+ Cu
問題：band broadening→efficiency降低，原因有三
(a) longitudinal diffusion(B/u)→按照擴散作用往周圍擴散，使帶變寬
(b) stationary phase(Cu)→因為溶質在mobile和stationary中都有分布，速度差異導致帶的變寬
(c) Eddy diffusion(A)→多重路徑的選擇(同位移，不同路徑長，時間被延展)
→綜合三個因素，得到方程式，並且得之流速會影響efficiency
此外，還有其他因素影響了efficiency
(a) 在packed column→填充物的大小(越小→efficiency越高)
(b) 在capillary column→管徑越小，efficiency越高
(7) Resolution：解析度，兩個峰值分離的程度
(a) 公式：2(峰值距離)/兩峰底寬之和
(b) 解析度越高→分離的效果越好
(c) 影響解析度的因素：
a. 理論板數(N)→板數越多，resolution越好→Rs正比於(N的根號)
b. elution time→時間越長，resolution越好→Rs正比於(t的根號)
c.改變retention factor(K)→溫度，solvent composition
d,改變α(selectivity factor)→solvent composition，溫度，stationary phase的選擇
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